食品中蛋白质的测定是一个涉及多种方法和技术的过程,以下是关于食品中蛋白质测定的详细回答:
一、测定方法概述
食品中蛋白质的测定方法主要包括生物化学方法、光谱法、色度法以及国家标准中规定的特定方法,如凯氏定氮法。这些方法各有特点,适用于不同类型的食品样品和不同的测定需求。
二、具体测定方法
生物化学方法
碱溶液提取法:通过强碱溶液处理食品样品,使蛋白质变为溶液中的游离氮,用酸中和,从而测定蛋白质的含量。该方法操作简便、结果准确,但可能会引入一些误差。
伯努利法:利用吸收波长处于280nm左右的多肽链或多肽链片段来测定蛋白质含量。通过测定吸收光的强度来推算出蛋白质的浓度。适用于含多肽链的样品。
生物素试验法:利用生物素与标记有酶的抗生素分子相结合来测定蛋白质的含量。该方法灵敏且结果稳定可靠。
光谱法
紫外-可见光光谱法:利用蛋白质分子中芳香族化合物的吸收峰来测定蛋白质的含量。其中,279nm波长的吸收峰对应着蛋白质的特征吸收峰。通过测量吸光度来计算蛋白质的含量。
红外光谱法:通过检测蛋白质分子中的功能基团振动特征来测定蛋白质的含量。该方法操作简便,且可以提供蛋白质的结构信息。
色度法
比色法:利用食品样品与其中一种试剂作用后的颜色反应来测定蛋白质的含量。常用的试剂有布莱特试剂、Lowry试剂和比显色法等。
光度法:利用针对蛋白质的特定试剂发生的光谱变化来测定蛋白质的含量。常用的试剂有Coomassie蓝试剂,通过与蛋白质结合产生颜色反应,再通过测量吸光度来计算蛋白质的含量。
电色谱法:利用蛋白质的分子电荷特性来测定蛋白质的含量。通过测定蛋白质在电场中的迁移速率来计算蛋白质含量。
国家标准方法——凯氏定氮法
原理:食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解,产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定,根据酸的消耗量计算氮含量,再乘以换算系数,即为蛋白质的含量。
实验步骤:包括消化、蒸馏、滴定和结果计算等步骤。其中,消化过程中需加入硫酸铜、硫酸钾和硫酸等试剂;蒸馏过程中使用定氮蒸馏装置;滴定过程中使用盐酸标准溶液;结果计算根据公式进行。
三、
食品中蛋白质的测定方法多种多样,选择哪种方法取决于样品的类型、测定要求以及实验室的条件。国家标准方法如凯氏定氮法具有准确性和广泛适用性,是常用的测定方法之一。随着科技的进步和检测技术的发展,新的测定方法不断涌现,为食品中蛋白质的测定提供了更多的选择。