生乳中β-内酰胺酶的测定,主要涉及到的是对牛奶中β-内酰胺酶含量的检测方法。以下是关于生乳中β-内酰胺酶测定的详细介绍:
一、测定方法
微生物培养法:
原理:利用克拉维酸、舒巴坦的特异性抑制β-内酰胺酶的特点做细菌培养,通过测量抑菌圈得出结果。
应用:该方法可以检测出牛奶中未反应完全(未失活)的β-内酰胺酶,适用于检测未经过任何加工的牛奶。
检出限:较低。
碘量法:
原理:利用β-内酰胺类抗生素的水解产物青霉噻唑酸与淀粉竞争游离碘,通过观察颜色变化得出结果。
应用:该方法可检出牛奶中已反应及未反应的β-内酰胺酶,适用于检测鲜奶及奶制品中的β-内酰胺酶。
检出限:较高。
间接法(高效液相色谱法):
原理:利用β-内酰胺酶能够酶解青霉素的原理,通过向牛奶中添加一定量的青霉素,观察青霉素经β-内酰胺酶酶解后浓度的变化,从而推断牛奶中是否存在β-内酰胺酶。
实验步骤:包括称取试样、离心、孵育、提取、固相萃取、洗脱、吹干、定容、上机测定等步骤。
色谱条件:包括高效液相色谱仪、色谱柱、流动相、检测波长等参数。
二、注意事项
在进行微生物培养法时,需要注意挑取细菌时菌量不要太多,尽量在纸片上涂布开。
在使用碘量法时,建议实验过程中使用阴性和阳性对照样,以便更准确的判断。
在进行间接法(高效液相色谱法)时,需要注意实验条件的控制,如温度、pH值、离心速度等,以确保实验结果的准确性。
三、临床意义
β-内酰胺酶是金黄色葡萄球菌和淋球菌等多种细菌产生的一种抗生素灭活酶,能裂解青霉素和头孢菌素等β-内酰胺类抗生素的β-内酰胺环,使其变成无抗菌活性的物质,从而表现为产酶细菌对这类抗生素耐药。因此,对牛奶中β-内酰胺酶的测定具有重要的临床意义,可以帮助我们了解牛奶中细菌对抗生素的耐药性情况,从而指导临床用药和食品安全监管。