ISO 10993-5-2009检测机构 医疗器械检测 体外细胞毒性试验

ISO 10993-5-2009《医疗器械生物学评价 第5部分：体外细胞毒性试验》是化组织（ISO）制定的医疗器械生物学评价标准，旨在评估医疗器械或其材料在与人体接触时可能对细胞造成的毒性反应，确保医疗器械的安全性。以下是对该标准的详细解读：

标准核心内容

1. 定义与范围

• 定义了细胞毒性、体外细胞毒性试验等关键术语。

• 适用于所有与人体接触的医疗器械，包括植入物、导管、敷料、牙科材料等。

• 规定了培养细胞与医疗器械或其提取物直接（或间接）接触的孵育过程，以及通过生物学参数评定哺乳动物细胞的反应。

2. 试验方法分类

• 提取物测试：将材料浸泡在特定溶剂中提取潜在毒性物质，再将提取液与细胞接触评估毒性。

• 直接接触测试：将材料直接与培养细胞接触，观察细胞形态变化和存活率。

• 间接接触测试：通过扩散方式使细胞与材料或其提取物接触，评估毒性影响。

3. 细胞系与培养基选择

• 常用细胞系：L-929小鼠成纤维细胞（因其敏感性和稳定性被广泛采用）。

• 培养基要求：需满足细胞生长需求，通常含10%胎牛血清的MEM培养基。

• 特殊要求：可根据材料性质选择极性或非极性提取介质（如生理盐水、DMSO）。

4. 试验步骤与质量控制

• 阴性对照（如高密度聚乙烯）：验证细胞背景响应值。

• 阳性对照（如含0.1%ZDEC的聚氨酯）：证明测试系统响应性。

• 空白对照：排除提取容器和过程干扰。

• 样本制备：需明确测试对象为提取物或材料本身，控制提取条件（温度、时间、介质）。

• 对照设置：

• 孵育条件：通常为37℃、5% CO₂，培养24-72小时。

• 结果评定：通过细胞形态观察、存活率计算（如MTT法）等定量或定性方法评估毒性。

关键技术要求

1. 细胞存活率判定标准

• 若浓度供试品浸提液的细胞存活率≥70%，提示无潜在细胞毒性；低于此值则判断为有毒性。

2. 提取条件控制

• 温度与时间：标准推荐37℃、24小时，但可根据材料临床使用情况调整（如短期接触皮肤器械可缩短时间至4小时）。

• 介质选择：需反映提取目的，如含血清培养基可提取极性和非极性物质，无血清培养基专用于极性物质提取。

3. 形态学评估

• 观察细胞变圆、裂解、空泡化等形态变化，结合定量数据（如存活率）综合判断毒性等级。

标准应用与意义

1. 医疗器械安全性评价

• 作为生物学评价的核心部分，确保材料与人体细胞接触不会引起损伤或功能障碍。

• 适用于出口医疗器械或国际合作项目，因ISO 10993-5:2009在国际范围内被广泛认可。

2. 与国内标准的关联

• 中国国家标准GB/T 16886.5-2017等同采用ISO 10993-5:2009，仅在术语表达、引用文件或格式上进行了适应性调整，核心内容一致。

• 在中国境内，医疗器械的体外细胞毒性试验通常需遵循GB/T 16886.5-2017。

3. 测试报告要求

• 需包含测试设备、人员、日期、样本描述、细胞系选择、培养基信息、测定方法、提取条件、对照结果、细胞反应观察及评估等细节。