药品检测微生物限度中药制剂(颗粒剂)/西药，中国药典2015年版检测机构

中国药典2015年版对药品微生物限度的检测进行了详细规定，针对中药制剂（如颗粒剂）和西药（如药用辅料）的微生物限度检查，主要涵盖需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数以及控制菌（如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等）的检测。以下从标准依据、检测项目、方法要点、结果判定及实际应用等方面进行系统解析：

标准依据与适用范围

1. 法规依据

• 中药制剂：颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液等非无菌制剂；

• 西药药用辅料：如淀粉、糊精、乳糖、聚乙二醇（PEG）等直接接触药品的辅料。

• 通则1105：微生物计数法（控制需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数）；

• 通则1106：控制菌检查法（检测特定致病菌）；

• 通则1107：非无菌药品微生物限度标准（明确不同剂型、用途药品的微生物限值）。

• 《中国药典》2015年版四部：

• 适用范围：

微生物限度检测项目与标准

1. 微生物计数（通则1105）

注：

• 局部用药或黏膜给药制剂限值更严（如需氧菌总数≤10² CFU/g）；

• 含药材原粉制剂（如中药颗粒剂）需氧菌总数可放宽至≤10⁴ CFU/g，但需符合风险评估要求。

2. 控制菌检查（通则1106）

关键检测方法与操作要点

1. 样品制备

• 中药颗粒剂：

• 取供试品 10 g，加入pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（或适宜稀释液）至 100 mL，振摇混匀后制成 1:10 供试液；

• 含药材原粉的颗粒剂需 超声处理（如250 W，30 min）以充分分散微生物。

• 西药药用辅料：

• 粉末状辅料（如淀粉）取 10 g，直接加入稀释液；

• 黏性辅料（如聚乙二醇）需加热至 40~50℃ 溶解后稀释。

2. 微生物计数方法

• 平皿法：

• 取供试液 1 mL 注入平皿，倾注 45℃ 胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA，用于需氧菌）或沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA，用于霉菌和酵母菌），混匀后凝固；

• 需氧菌培养条件：30~35℃，3~5天；霉菌和酵母菌培养条件：20~25℃，5~7天。

• 薄膜过滤法（适用于抑菌性样品）：

• 将供试液 100 mL 通过 0.45 μm 微孔滤膜过滤，用稀释液冲洗滤膜 3次；

• 将滤膜转移至培养基表面，按平皿法条件培养。

3. 控制菌检查方法

• 大肠埃希菌：

1. 增菌培养：取供试液 10 mL 加入 100 mL 胆盐乳糖培养基（BL），30~35℃ 培养 18~24小时；

2. 分离培养：取增菌液 1 mL 接种至 麦康凯琼脂平板，30~35℃ 培养 18~72小时，挑取可疑菌落进行生化鉴定（如吲哚、甲基红试验）。

• 金黄色葡萄球菌：

1. 增菌培养：取供试液 10 mL 加入 100 mL 胰酪大豆胨液体培养基（TSB），30~35℃ 培养 18~24小时；

2. 分离培养：取增菌液划线接种至 血琼脂平板，30~35℃ 培养 18~72小时，挑取可疑菌落进行血浆凝固酶试验。

结果判定与报告要求

1. 微生物计数结果判定

• 需氧菌总数：取 2个平皿 的平均菌落数，若菌落数≤100 CFU，按实际数报告；若>100 CFU，采用两位有效数字报告（如150 CFU报告为1.5×10² CFU）；

• 霉菌和酵母菌总数：同需氧菌计数规则，但限值更严格（≤10² CFU/g）。

2. 控制菌检查结果判定

• 阳性结果：任一培养基或试验步骤中检出目标控制菌（如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌），判定为不符合规定；

• 阴性结果：所有培养基和试验步骤均未检出目标菌，且阴性对照（稀释液）无菌生长，判定为符合规定。

3. 报告内容

• 需明确标注 供试品名称、批号、规格、检测项目、检测方法、结果（CFU/g或“未检出”）及判定；

• 控制菌检查需附 菌落形态描述、生化试验结果及图谱（如血琼脂平板照片）。

实际应用与案例分析

案例1：中药颗粒剂微生物污染调查

• 问题：某企业生产的感冒清热颗粒（中药颗粒剂）在抽检中被检出霉菌和酵母菌总数超标（实测值2.5×10³ CFU/g，标准≤10² CFU/g）。

• 原因分析：

• 原料药材（如薄荷、桔梗）未严格清洗，携带田间霉菌；

• 干燥工序温度不足（实际60℃，标准≥80℃），导致水分残留促进霉菌繁殖；

• 内包装材料（复合膜）未进行微生物限度控制，可能引入二次污染。

• 整改措施：

• 加强原料药材前处理（清洗、灭菌）；

• 优化干燥工艺参数（温度85℃，时间2小时）；

• 增加内包装材料微生物限度检测项目。

案例2：西药药用辅料控制菌检出

• 问题：某批次药用辅料聚乙二醇（PEG 4000）在控制菌检查中检出金黄色葡萄球菌。

• 原因分析：

• 生产设备（反应釜）清洗不彻底，残留前批次高风险物料；

• 操作人员未严格遵循无菌操作规范（如未佩戴无菌手套）；

• 环境监测（如空气沉降菌）未定期开展，无法及时发现污染源。

• 整改措施：

• 实施设备清洗验证（如采用ATP生物荧光法检测残留）；

• 加强人员无菌操作培训（如模拟灌装试验）；

• 建立环境监测计划（如每日对洁净区进行浮游菌检测）。

质量控制与注意事项

1. 培养基适用性检查

• 每批新购培养基需进行 灵敏度试验（如接种≤100 CFU的标准菌株，观察生长情况）；

• 胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）需验证对 铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌 的促生长能力。

2. 方法适用性验证

• 对含抑菌成分的样品（如中药颗粒剂中的黄芩苷），需通过 中和剂（如β-内酰胺酶）或稀释法 消除抑菌作用；

• 验证试验需包括 回收率试验（如向样品中添加标准菌株，回收率应≥50%）。

3. 环境与人员要求

• 微生物检测应在 B级背景下的A级单向流洁净区 进行；

• 操作人员需每年进行 健康检查（如无传染性疾病），并定期接受微生物检测技能培训。

标准更新与替代动态

• 现行状态：中国药典2015年版仍为部分企业执行标准，但2020年版及2025年版已对微生物限度检测进行修订：

• 2020年版：增加 非无菌药品微生物控制指导原则，强化风险评估理念；

• 2025年版（征求意见稿）：引入 快速微生物检测方法（如基于PCR的分子生物学技术），缩短检测周期。

• 国际对标：

• USP<61>/<62>：美国药典微生物限度检查方法，与ICH指南协调；

• EP 2.6.12/2.6.13：欧洲药典方法，强调 替代方法验证（如流式细胞术）。

中国药典2015年版为药品微生物限度检测提供了科学、规范的技术框架，企业需严格遵循通则1105、1106和1107的要求，结合产品特性优化检测流程，关注标准更新动态以适应监管变化。通过加强原料控制、工艺优化和环境监测，可有效降低微生物污染风险，保障药品质量安全。