饲料中莫能菌素的测定，NY/T 725-2003

饲料中莫能菌素的测定通常遵循特定的标准和方法，以下是关于该测定过程的详细步骤和参考信息：

一、测定原理

饲料中莫能菌素的测定主要采用高效液相色谱法（HPLC），结合柱后衍生化技术和紫外检测器。该方法利用甲醇-水提取试样中的莫能菌素，并通过特定的流动相和衍生剂进行分离和检测。

二、试剂和溶液

• 试剂：除另有说明外，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/6682二级用水的规定。

• 香草醛衍生液：量取一定量浓硫酸，缓慢加入250mL甲醇中，置冰水浴中，缓缓加入香草醛，混匀，脱气后避光保存，临用现配。

• 莫能菌素标准液：准确称取莫能菌素标准品，用甲醇溶解并定容，配置成一系列浓度的标准工作液。

三、仪器和设备

• 高效液相色谱仪：配柱后衍生化装置和紫外检测器。

• 离心机：用于样品处理。

• 振荡器：辅助样品提取。

• 玻璃具塞三角瓶（250mL）：用于样品提取。

• 微量进样器：用于进样。

• 微孔滤膜（0.45μm）：用于样品过滤。

四、测定步骤

1. 样品制备：取有代表性的饲料样品，经粉碎后全部过筛，称取一定量的试样置于玻璃具塞三角瓶中。

2. 提取：加入试样提取液，往复震荡一定时间后静止，过滤。重复提取两次，合并三次提取液。

3. 定容和过滤：用试样提取液定容到一定体积，用0.45μm微孔有机滤膜过滤作为试样溶液。

4. HPLC色谱条件：

• 色谱柱：Cie柱，长150mm，内径（具体尺寸需根据设备确定）。

• 流动相：甲醇、冰乙酸、水（具体比例需根据实验条件确定）。

• 反应管：不锈钢长10m，内径（具体尺寸需根据设备确定）。

• 反应温度：95°C。

• 检测波长：520nm。

• 进样体积：20μL。

5. HPLC测定：取适量试样溶液和相应浓度的莫能菌素标准工作液进行测定，记录色谱图。

6. 结果计算：根据标准曲线和峰面积计算饲料中莫能菌素的含量。

五、注意事项

• 实验中所有操作应严格按照标准和方法进行，以确保测定结果的准确性。

• 试剂和溶液的配置应准确，避免误差。

• 仪器和设备应定期校准和维护，以保证其性能和准确性。

六、

饲料中莫能菌素的测定是一个复杂但重要的过程，通过高效液相色谱法结合柱后衍生化技术和紫外检测器可以准确测定饲料中莫能菌素的含量。在测定过程中，需要注意试剂和溶液的配置、仪器和设备的校准和维护以及操作的规范性，以确保测定结果的准确性和可靠性。