医疗器械皮肤致敏试验

医疗器械皮肤致敏试验是评估医疗器械或其材料与人体皮肤接触后引发过敏反应风险的关键环节，以下从试验方法、动物选择与准备、试验流程、观察与记录、结果判定与综合分析等方面进行介绍：

试验方法

医疗器械皮肤致敏试验主要有以下三种方法：

1. 豚鼠Zui大剂量试验（GPMT）：

• 原理：通过皮内诱导和局部激发两个阶段，观察豚鼠皮肤对试验样品的致敏反应。

• 应用：适用于大多数医疗器械产品，尤其是需要评估强致敏性的情况。

• 特点：该方法敏感度高，是欧洲国家广泛使用的经典方法。

2. 封闭式贴敷试验（Buehler试验）：

• 原理：通过多次局部贴敷试验样品，诱导皮肤致敏反应，再通过激发阶段观察反应。

• 应用：适用于局部应用产品，如外用医疗器械、敷料等。

• 特点：美国常用此方法，操作相对简单，但敏感度略低于GPMT。

3. 局部淋巴结试验（LLNA）：

• 原理：通过检测小鼠耳部引流淋巴结内淋巴细胞增殖情况，定量评估致敏性。

• 应用：被经济与合作发展组织（OECD）接受作为豚鼠试验的替代方法，适用于化学品和部分医疗器械的致敏性评估。

• 特点：相对更敏感和客观，减少动物用量，试验周期较短。

动物选择与准备

1. 豚鼠：

• 选择标准：健康、初成年的豚鼠，体重在300-500克之间，雌雄不限，雌鼠应未产并无孕。

• 准备：试验前需确保豚鼠皮肤完整，无损伤或疾病。对豚鼠进行编号，并饲养在合适的环境中，温度控制在20-26℃，相对湿度在40%-70%，保持12小时光照/12小时黑暗的周期，让豚鼠适应环境至少3-5天。

2. 小鼠：

• 选择标准：成年未生育过且未受孕的雌性小鼠，8周龄-12周龄，动物体重不超过平均体重的±20%。

• 准备：试验前需对小鼠进行编号，并称量体重。

试验流程

1. 样品准备：

• 医疗器械产品需要按照实际使用情况进行样品准备。对于固体医疗器械，如医用胶带，要将其剪成适当大小的样本，确保样本的表面积符合试验要求。如果是液体或半固体产品，如皮肤敷料中的凝胶成分，要准确量取一定体积，并且保证样品的均匀性。

• 要设置阳性对照（如已知的强致敏剂，如2,4-二硝基氯苯）和阴性对照（如生理盐水或不引起过敏的基质）。

2. 诱导期：

• GPMT：将准备好的医疗器械样品或对照物质涂抹在豚鼠背部去毛后的皮肤上，一般采用封闭敷贴的方式，敷贴时间通常为6-8小时。诱导期可能需要进行多次，比如在第0天、第7天进行诱导，以增强致敏反应的可能性。

• Buehler试验：按选定的试验样品浓度，将合适的敷贴片浸透试验样品，局部敷贴于每只动物的左上背部位。6±0.5小时后除去任何封闭式包扎带类的固定物和敷贴片。1周中连续3天重复该步骤，同法操作3周。对照组动物仅使用空白液同法操作。

• LLNA：在试验开始和结束时应记录每只动物体重，将适宜的样品应用于指定小鼠双耳的背侧，剂量为25μL/d，连续3天。

3. 激发期：

• GPMT：在诱导期结束后的一定时间（如第14天）进行激发。将医疗器械样品涂抹在豚鼠腹部或其他未经过诱导处理的皮肤部位，观察皮肤反应。激发的剂量和时间等条件要和诱导期保持一致或根据具体试验方案调整。

• Buehler试验：Zui后一次诱导敷贴后14±1天用试验样品对全部试验动物和对照动物进行激发，按选定的试验样品浓度将合适的敷贴片浸透试验样品单独局部贴敷于每只动物去毛的未试部位。6±0.5小时后除去固定物、封闭包扎带和敷贴片。

• LLNA：无需激发阶段，直接通过检测淋巴结细胞增殖情况来评估致敏性。

观察与记录

1. 观察时间：

• 在激发后的不间点（如24小时、48小时、72小时）观察豚鼠皮肤反应。对于LLNA，则通过测定每只小鼠每分钟淋巴结细胞计数（cpm）的放射活性水平来评估。

2. 观察内容：

• 皮肤红斑、水肿的程度。按照国际通用的皮肤反应评分标准进行评分，如红斑程度可以分为无红斑（0分）、轻度红斑（1分）、中度红斑（2分）、重度红斑（3分）；水肿程度分为无水肿（0分）、轻度水肿（1分）、中度水肿（2分）、重度水肿（3分）。

• 记录是否有其他异常反应，如皮肤瘙痒、破溃等。

结果判定与综合分析

1. 致敏率计算：

• GPMT：根据观察到的皮肤反应情况，计算致敏率。致敏率=出现阳性反应的动物数/试验动物总数×。如果致敏率低于10%，一般认为该医疗器械产品为弱致敏性；致敏率在10%-30%之间为轻度致敏性；致敏率在30%-60%之间为中度致敏性；致敏率高于60%为高度致敏性。

• LLNA：测定每只小鼠每分钟淋巴结细胞计数（cpm）的放射活性水平。试验cpm除以空白cpm得出刺激指数（SI），试验样品SI≥3.0，考虑阳性，为致敏物。阳性对照样品SI应≥3.0。

2. 综合判定：

• 除了致敏率，还要结合其他观察到的反应来综合判定医疗器械产品是否通过皮肤致敏刺激试验。如果仅有个别豚鼠出现轻微红斑，且在短时间内自行恢复，致敏率较低，那么该产品可能被判定为通过试验。但如果出现较多豚鼠有重度红斑、水肿，或者有其他严重皮肤反应，如皮肤坏死等情况，或者致敏率较高，则判定该医疗器械产品未通过试验。