常规溶血试验 (兔血) 检测

常规溶血试验（兔血）检测是一种通过观察医疗器械、药物或化学物质与兔血接触后是否引发红细胞破裂（溶血）来评估其血液相容性的体外试验方法，以下是该检测方法的详细介绍：

检测原理

溶血是指红细胞在特定条件下破裂，释放出血红蛋白和其他细胞内容物的过程。常规溶血试验（兔血）检测基于这一原理，通过测定红细胞释放的血红蛋白量，来判定供试品的体外溶血程度。当生物材料或其浸提液与血液接触时，若存在溶血成分，会导致红细胞破坏和血红蛋白释放，游离血浆中的血红蛋白增加，从而产生对机体的毒副作用。

检测步骤

1. 实验动物与试剂准备：

• 选用健康家兔作为实验动物。

• 制备新鲜稀释抗凝兔血：根据实验用量由健康家兔心脏采血，加入适量抗凝剂（如质量浓度20g/l的草酸钾溶液）制备成新鲜抗凝兔血。再取新鲜抗凝兔血，加入质量浓度9g/l的氯化钠注射液进行稀释。

• 准备其他试剂和器材，如紫外分光光度计、水浴锅、离心机、15ml塑料离心管等。

2. 供试品处理：

• 选取待测样本，如医疗器械的浸提液、药物溶液等。

• 根据实验设计，将供试品按一定比例（如GB/T13886.12规定的浸提比例3cm²/ml）加入到试管中，再加入适量氯化钠注射液。

3. 分组与加样：

• 设置供试品组、阴性对照组和阳性对照组。

• 阴性对照组每管加入氯化钠注射液作为阴性对照；阳性对照组每管加入蒸馏水作为阳性对照。

• 每组平行操作一定数量的试管（如3管），以确保实验结果的可靠性。

4. 孵育与观察：

• 将全部试管放入恒温水浴中，在（37±1）℃条件下保温一定时间（如30min）。

• 每只试管中加入一定量（如0.2ml）稀释的新鲜兔血，轻轻混匀后，继续放在恒温水浴箱中，在（37±1）℃条件下孵育一定时间（如60min）。

• 孵育结束后，观察溶液的颜色变化、红细胞的沉降情况等参数。

5. 离心与测定：

• 将管内液体以一定离心力（如800g）离心一定时间（如5min）。

• 吸取上清液移入比色皿内，用分光光度计在特定波长（如545nm）处测定吸光度。

观察指标与结果判断

1. 观察指标：

• 溶液颜色变化：若溶液呈澄明红色，表明有溶血发生；若红细胞全部下沉，上清液无色澄明，则表明没有溶血发生。

• 吸光度值：通过测定上清液的吸光度值，可以定量评估溶血程度。

2. 结果判断：

• 阴性对照组的吸光度值应不大于0.03，否则可能表明实验操作存在问题，需要重新试验。

• 阳性对照组的吸光度应为0.8±0.3，以验证实验系统的有效性。

• 供试品组的吸光度值与对照组进行比较，根据吸光度值的大小和溶液颜色变化来判断供试品是否引发溶血以及溶血程度。

数据分析与结果评价

1. 吸光度值分析：

• 计算供试品组与对照组吸光度的平均值，以减小实验误差。

• 通过比较供试品组与阴性对照组的吸光度值差异，评估供试品的溶血性能。

2. 结果评价标准：

• 根据吸光度值的大小和溶液颜色变化，可以将供试品的溶血性能分为不同等级，如无溶血、轻度溶血、中度溶血和重度溶血。

• 结合实验目的和要求，对供试品的溶血性能进行综合评价。例如，对于医疗器械而言，溶血性能评价是生物相容性评价的重要组成部分；对于药物而言，溶血性能评价有助于了解药物的毒性和安全性。

检测标准与规范

1. 国内标准：

• 《医疗器械生物学评价 第4部分：与血液相互作用试验选择》（GB/T 16886.4-2003）等标准规定了常规溶血试验（兔血）检测的方法和要求。

2. ：

• ISO 10993系列标准中也包含了与血液相互作用试验相关的内容，为常规溶血试验（兔血）检测提供了国际参考。

3. 操作规范：

• 实验过程应严格遵守无菌操作原则，避免污染和交叉感染。

• 实验器材和试剂应保持清洁和完好，以确保实验结果的准确性。

• 实验人员应接受专业培训，熟悉实验流程和操作规范。