抑菌环试验是一种常用的生物学实验方法,主要用于评估物质的抑菌效果。其原理是利用抑菌剂在琼脂培养基中不断溶解扩散,形成不同浓度的抑菌剂梯度,通过观察抑菌环的大小来判断物质的抑菌能力。这种试验方法适用于抑菌剂与溶出性抗(抑)菌产品的鉴定。
以下是抑菌环试验的一般步骤:
准备菌悬液和培养基:挑取菌种于带玻璃珠的无菌水中,振荡使孢子分散,过滤后制成混合孢子悬液。向培养皿中注入一定量的混合孢子悬浮液和熔化状琼脂培养基,混合均匀,待其冷却。
制备抑菌剂样片:将抑菌剂溶液滴加到滤纸片上,将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内,置温箱中烤干备用。
接种试验菌:用无菌棉拭子蘸取试验菌悬液,在营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次,平板应转动60°,Zui后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平皿,置室温干燥5min。
贴放抑菌剂样片:用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距25mm以上,与平板的周缘相距15mm以上。贴放好后,用无菌镊子轻压样片,使其紧贴于平板表面。
培养观察:盖好玻璃皿,置于恒温箱中培养一定时间(通常为24h)。观察抑菌环的形成情况,用游标卡尺测量抑菌环的直径并记录。试验重复3次。
需要注意的是,所有的操作用具和材料都要事先进行灭菌处理,操作必须在无菌室(或无菌箱)内于火焰旁进行。混合菌液的浓度、倒入培养皿的琼脂培养基温度、培养时间等因素都可能影响试验结果,需要严格控制实验条件。
通过抑菌环试验,可以初步评估物质的抑菌效果,为研究和应用提供参考依据。